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LC液相色谱仪工作人员在遇到问题时应采取的必要措施
发布时间:2019-01-23   点击次数:279次
   LC液相色谱仪不适用于温度环境。通常,操作要求可在室温5至35°C下满足。通常,湿度环境需要为20%至85%。在高湿度区域,当使用某些类型的气相色谱仪时,由于高环境湿度,气相色谱仪的绝缘性能会降低,如果操作灵敏度高,响应值会降低。使用气相色谱仪时,工作人员在遇到上述现象时应采取必要措施。
 
  LC液相色谱仪系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,LC液相色谱仪被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统,下面将分别叙述其各自的组成与特点。
 
  选择LC液相色谱仪入口和检测器类型的色谱柱尺寸和垫片材料;避免气相色谱仪重复使用垫圈;使用合适的柱切割工具(如陶瓷板或金刚石切割刀)进行柱切割;在将气相色谱仪色谱柱安装在进样口和检测器中之前,确保色谱柱头清洁平整;安装气相色谱仪制造商的要求,将色谱柱安装插入入口和检测器的适当距离;气相色谱仪色谱柱必须放在色谱柱上,毛细管色谱柱的任何部分都不能接触色谱柱的壁;确保烤箱加热前所有接头都没有泄漏,载气中不含氧气;通过注射检查LC液相色谱仪色谱柱是否正确安装,无需保留化合物或使用气相色谱仪软件程序,并设定载气的线性流速。
 
  LC液相色谱仪的使用方法的具体步骤
 
  1、LC液相色谱仪它包括空柱和填料。空柱是内壁抛光的不锈钢管,内径为4~5mm,长100~250mm。按气相色谱法中洗涤空柱的方法洗净,用匀浆法填充固定相。将此柱装入仪器的管路中,用柱式机械往复泵输入新鲜脱气的流动相。
 
  等基线平直后可用苯、萘、菲的混合试液,用正己烷(含 0.05%甲醇)或甲醇:水(83:17)为流动相测定柱效及分离度塔板数在2~3万/ml以上及分离度在1.5以上者,柱效好。为防止柱污染,常用1个50mm长,4~5mm内径,装有硅胶(40-50mm)或立柱相同填料的保护柱(预柱)接在主柱之前,以延长色谱柱的寿命。反相键合相柱用毕。必须用水充分流经,以洗去盐类、酸碱等杂质防止柱生锈及填料中杂质的积聚,再用甲醇流经洗涤使色谱柱获得再生。
 
  2、流动相的洗脱方式配好经脱气的流动相放于贮液瓶中,经过有滤过头、内径2mm的聚四氟乙烯管流入高压泵进入色谱柱,zui后自检测器流出或收集或作废液回收。用流动相洗脱的方式有恒溶剂脱洗法,即自洗脱开始到结束,溶剂的配比恒定。
 
  另一类为梯度洗脱法,即使溶剂的极性强度在色谱过程中逐渐增加。须按一定程序不断改变流动相的浓度配比,从而使同一个试样中组分性质相差较小的及较大的都能在一次色谱过程中很好分离,而整个色谱过程缩短。必须注意,梯度洗脱法不能用于分子排阻色谱及用电化学检测的反相液相色谱法中。
 
  3、检测器适用于血药浓度的检测器有紫外线吸收,荧光发射和电化学三种。紫外检测器应用于对紫外光有吸收的药物,大多数药物分子对紫外光有吸收,故能较普遍采用,检测限有0.1μg左右。紫外检测器有固定波长型、可变波长型及扫描器,既能使流动相停流作组分的定性定量检测,又能提高测定灵敏度,重现性较好。荧光发射检测器对能产生荧光的药物才能使用。
 
  80年代应用激光替代氙灯光源,光强度增加了3~4倍,对某些药物的检测限可达pg级。电化学检测器是由一个碳糊或破碳做成的蒲层电解池。常用于检测儿茶酚胺类及有酚类基团的各种药物和代谢物。流出组分进入2μl的薄层电解池,在一暄电压下电解产生电流,放大后检测,检测限pg级。
 
  4、数据处理现代液相色谱仪带有数据处理系统,除记录谱外,还能自动记录峰的保留时间,能自动积分求算峰面积,并能按照预定的程序作有关计算,报告分析结果。
 
  LC液相色谱仪的要求
 
  1、流动相必须用HPLC级的试剂,使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45μm或更细的膜过滤)。
 
  2、流动相过滤后要用超声波脱气,脱气后应该恢复到室温后使用。
 
  3、不能用纯乙腈作为流动相,这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
 
  4、使用缓冲溶液时,做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时,然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上,以充分洗去离子。对于柱塞杆外部,做完样品后也必须用去离子水冲洗20mL以上。
 
  5、长时间不用仪器,应该将柱子取下用堵头封好保存,注意不能用纯水保存柱子,而应该用有机相(如,甲醇等),因为,纯水易长霉。
 
  6、LC液相色谱仪每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
 
  7、C18柱不能进蛋白样品,血样、生物样品。
 
  8、堵塞导致压力太大,按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗,清洗方法:
 
  ①以异丙醇作溶剂冲洗;
 
  ②放在异丙醇中间用超声波清洗;
 
  ③用10%稀硝酸清洗;
 
  9、气泡会致使压力不稳,重现性差,所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
 
  10、如果进液管内不进液体时,LC液相色谱仪要使用注射器吸液:通常在输液前要进行流动相的清洗。
 
  11、LC液相色谱仪要注意柱子的pH值范围,不得注射强酸强碱的样品,特别是碱性样品。
 
  12、更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗,然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。

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